Yozgi ilmiy qo'llanma: 40°C issiqlik to'lqini molekulyar tajribalar bilan uchrashganda

So'nggi paytlarda Xitoyning katta qismida yuqori haroratlar saqlanib qolmoqda. 24-iyul kuni Shandong provinsiyasi meteorologiya rasadxonasi sariq rangli yuqori harorat haqida ogohlantirish e'lon qildi va ichki hududlarda keyingi to'rt kun davomida "saunaga o'xshash" harorat 35-37°C (111-133°F) va 80% namlik bo'lishini bashorat qildi. Shinjonning Turpan kabi joylarida harorat 48°C (111-133°F) ga yaqinlashmoqda. Xubeyning Uxan va Syaogan shaharlarida to'q sariq ogohlantirish e'lon qilindi, ba'zi hududlarda harorat 37°C dan oshdi. Bu jazirama issiqda pipetkalar yuzasi ostidagi mikroskopik dunyo g'ayrioddiy buzilishlarni boshdan kechirmoqda - nuklein kislotalarning barqarorligi, fermentlarning faolligi va reagentlarning fizik holati issiqlik to'lqini tomonidan jimgina buziladi.

Nuklein kislotasini ekstraksiya qilish vaqtga qarshi poygaga aylandi. Tashqi havo harorati 40°C dan oshganda, hatto konditsioner yoqilgan bo'lsa ham, operatsiya stolining harorati ko'pincha 28°C dan yuqori bo'ladi. Bu vaqtda ochiq havoda qoldirilgan RNK namunalari bahor va kuzga qaraganda ikki baravar tezroq parchalanadi. Magnit munchoqli ekstraksiyada bufer eritmasi erituvchining tez uchuvchanligi tufayli mahalliy darajada to'yingan bo'ladi va kristallar osongina cho'kadi. Bu kristallar nuklein kislotasini ushlash samaradorligida katta tebranishlarga olib keladi. Organik erituvchilarning uchuvchanligi bir vaqtning o'zida oshadi. 30°C da xloroformning uchuvchanligi miqdori 25°C ga nisbatan 40% ga oshadi. Ish paytida tutun qopqog'idagi shamol tezligi 0,5 m/s ga teng bo'lishini ta'minlash va himoya samaradorligini saqlab qolish uchun nitril qo'lqoplardan foydalanish kerak.

PCR tajribalari yanada murakkab harorat buzilishlariga duch keladi. Taq fermenti va teskari transkriptaza kabi reagentlar haroratning keskin o'zgarishiga juda sezgir. -20°C muzlatgichdan chiqarilgandan keyin naycha devorlarida kondensatsiya reaksiya tizimiga kirsa, ferment faolligining 15% dan ortiq yo'qotilishiga olib kelishi mumkin. dNTP eritmalari xona haroratiga (>30°C) atigi 5 daqiqa ta'sir qilgandan keyin ham aniqlanadigan degradatsiyani ko'rsatishi mumkin. Asbobning ishlashi yuqori haroratlar bilan ham qiyinlashadi. Laboratoriya muhitining harorati >35°C bo'lganda va PCR asbobining issiqlik tarqalish oralig'i yetarli bo'lmaganda (devordan <50 sm), ichki harorat farqi 0,8°C gacha yetishi mumkin. Bu og'ish 96 quduqli plastinka chetidagi kuchaytirish samaradorligining 40% dan ortiq pasayishiga olib kelishi mumkin. Chang filtrlarini muntazam ravishda tozalash kerak (chang to'planishi issiqlik tarqalish samaradorligini 50% ga kamaytiradi) va to'g'ridan-to'g'ri konditsionerdan saqlanish kerak. Bundan tashqari, PCR tajribalarini bir kechada o'tkazayotganda, PCR asbobini namunalarni saqlash uchun "vaqtinchalik muzlatgich" sifatida ishlatishdan saqlaning. 4°C da 2 soatdan ortiq saqlash qizdirilgan qopqoq yopilgandan keyin kondensatsiya hosil bo'lishiga olib kelishi mumkin, bu reaksiya tizimini suyultirishi va asbobning metall modullarini zanglashi mumkin.

Yuqori harorat haqida doimiy ogohlantirishlarga duch kelgan molekulyar laboratoriyalar ham signal berishlari kerak. Qimmatbaho RNK namunalari -80°C muzlatgichning orqa qismida saqlanishi kerak, kirish yuqori haroratli davrlarda cheklangan bo'lishi kerak. -20°C muzlatgichning eshigini kuniga besh martadan ko'proq ochish harorat o'zgarishini kuchaytiradi. Yuqori issiqlik hosil qiluvchi uskunalar ikki tomondan va orqa tomondan kamida 50 sm issiqlik tarqalish joyini talab qiladi. Bundan tashqari, tajriba vaqtini qayta tuzish tavsiya etiladi: RNK ekstraksiya va qPCR yuklash kabi haroratga sezgir operatsiyalar uchun soat 7:00-10:00; ma'lumotlarni tahlil qilish kabi eksperimental bo'lmagan ishlar uchun soat 13:00-16:00. Ushbu strategiya yuqori harorat cho'qqilarining muhim bosqichlarga xalaqit berishining oldini olishi mumkin.

Issiqlik paytida molekulyar tajribalar ham texnika, ham sabr-toqat sinovidir. Yozning shafqatsiz quyoshi ostida, ehtimol, pipetkangizni qo'yib, asbob ko'proq issiqlikni tarqatishi uchun namunalaringizga qo'shimcha muz qutisi qo'shish vaqti keldi. Harorat o'zgarishiga bo'lgan bu hurmat, jazirama yoz oylarida eng qimmatli laboratoriya fazilatidir - axir, yozning 40°C issiqligida hatto molekulalar ham ehtiyotkorlik bilan himoyalangan "sun'iy qutb mintaqasi"ga muhtoj.