Yozgi ilmiy qo'llanma: 40 ° C issiqlik to'lqini molekulyar tajribalar bilan uchrashganda

Yaqinda Xitoyning katta qismida yuqori harorat saqlanib qoldi. 24-iyul kuni Shandun provinsiyasi meteorologiya observatoriyasi keyingi to‘rt kun davomida ichki hududlarda 35-37°C (111-133°F) “saunaga o‘xshash” harorat va 80% namlikni bashorat qilgan holda yuqori harorat haqida sariq ogohlantirish chiqardi. Turpan, Shinjon kabi joylarda havo harorati 48°C (111-133°F) ga yaqinlashmoqda. Xubeydagi Vuxan va Syaogan shaharlarida to‘q sariq rang darajasida, ayrim hududlarda havo harorati 37°C dan oshdi. Ushbu jazirama issiqda pipetkalar yuzasi ostidagi mikroskopik dunyo noodatiy buzilishlarni boshdan kechirmoqda - nuklein kislotalarning barqarorligi, fermentlarning faolligi va reagentlarning jismoniy holati issiqlik to'lqini ta'sirida jimgina buziladi.

Nuklein kislotasini olish vaqtga qarshi poygaga aylandi. Tashqi havo harorati 40 ° C dan oshganda, hatto konditsioner yoqilgan bo'lsa ham, operatsiya stolining harorati ko'pincha 28 ° C dan yuqori bo'ladi. Bu vaqtda ochiq joyda qolgan RNK namunalari bahor va kuzga qaraganda ikki baravar tez parchalanadi. Magnit boncuk ekstraktsiyasida bufer eritmasi erituvchining tez uchuvchanligi tufayli mahalliy darajada to'yingan bo'ladi va kristallar osongina cho'kadi. Bu kristallar nuklein kislotani tutib olish samaradorligida katta tebranishlarga olib keladi. Organik erituvchilarning uchuvchanligi bir vaqtning o'zida ortadi. 30 ° C da xloroformning uchuvchanligi miqdori 25 ° S ga nisbatan 40% ga oshadi. Ish paytida, dudbo'rondagi shamol tezligi 0,5 m / s bo'lishini ta'minlash va himoya samaradorligini saqlab qolish uchun nitril qo'lqoplardan foydalanish kerak.

PCR tajribalari yanada murakkab harorat buzilishlariga duch keladi. Taq fermenti va teskari transkriptaza kabi reaktivlar haroratning keskin o'zgarishiga juda sezgir. -20 ° C muzlatgichdan chiqarilgandan so'ng trubka devorlarida kondensatsiya reaktsiya tizimiga kirsa, ferment faolligini 15% dan ortiq yo'qotishiga olib kelishi mumkin. dNTP eritmalari xona haroratiga (>30°C) atigi 5 daqiqa ta'sir qilgandan so'ng aniqlanadigan degradatsiyani ham ko'rsatishi mumkin. Asbobning ishlashiga yuqori harorat ham to'sqinlik qiladi. Laboratoriyadagi atrof-muhit harorati >35 ° C bo'lsa va PCR asbobining issiqlik tarqalish klirensi etarli bo'lmasa (devordan <50 sm), ichki harorat farqi 0,8 ° C ga yetishi mumkin. Ushbu og'ish 96 quduqli plastinkaning chetida kuchaytirish samaradorligini 40% dan ko'proq pasayishiga olib kelishi mumkin. Chang filtrlarini muntazam tozalash kerak (chang to'planishi issiqlik tarqalish samaradorligini 50% ga kamaytiradi) va to'g'ridan-to'g'ri konditsionerdan qochish kerak. Bundan tashqari, bir kechada PCR tajribalarini o'tkazayotganda, namunalarni saqlash uchun PCR asbobini "vaqtinchalik muzlatgich" sifatida ishlatishdan saqlaning. 4°C haroratda 2 soatdan ortiq saqlash isitiladigan qopqoq yopilgandan keyin kondensatsiya hosil bo‘lishiga olib keladi, bu reaksiya tizimini suyultirishi va asbobning metall modullarini korroziyaga olib kelishi mumkin.

Doimiy yuqori haroratli ogohlantirishlarga duch kelgan molekulyar laboratoriyalar ham signal berishlari kerak. Qimmatbaho RNK namunalari yuqori haroratli davrlarda kirish cheklangan holda -80°C muzlatgichning orqa qismida saqlanishi kerak. -20 ° C sovuqxona eshigini kuniga besh martadan ortiq ochish harorat o'zgarishini kuchaytiradi. Yuqori issiqlik ishlab chiqaradigan uskunalar har ikki tomon va orqa tomondan kamida 50 sm issiqlik tarqalish joyini talab qiladi. Bundan tashqari, tajriba vaqtini qayta qurish tavsiya etiladi: RNK ekstraktsiyasi va qPCR yuklash kabi haroratga sezgir operatsiyalar uchun 7:00-10:00; Ma'lumotlarni tahlil qilish kabi eksperimental bo'lmagan ishlar uchun 13:00-16:00. Ushbu strategiya yuqori haroratli cho'qqilarning muhim qadamlarga xalaqit berishining oldini oladi.

Issiqlik paytida molekulyar tajribalar ham texnika, ham sabr-toqatning sinovidir. Yozning tinimsiz quyoshi ostida, ehtimol, pipetkani qo'yish va asbob ko'proq issiqlikni tarqatish uchun namunalaringizga qo'shimcha muz qutisini qo'shish vaqti keldi. Haroratning o'zgarishiga bo'lgan hurmat - bu jazirama yoz oylarida eng qimmatli laboratoriya sifati - yozning 40 ° C jaziramasida hatto molekulalar ham ehtiyotkorlik bilan qo'riqlanadigan "sun'iy qutb mintaqasiga" muhtoj.