Efiopiyada SARS-CoV-2 ni aniqlash uchun to'rtta nuklein kislotani kuchaytirish tahlilining bajarilishi

Nature.com saytiga tashrif buyurganingiz uchun tashakkur.Siz cheklangan CSS-ni qo'llab-quvvatlaydigan brauzer versiyasidan foydalanmoqdasiz.Eng yaxshi tajriba uchun yangilangan brauzerdan foydalanishni tavsiya qilamiz (yoki Internet Explorer-da Moslik rejimini o'chirib qo'ying).Bundan tashqari, doimiy qo'llab-quvvatlashni ta'minlash uchun biz saytni uslublar va JavaScriptlarsiz ko'rsatamiz.
Bir vaqtning o'zida uchta slayddan iborat karuselni ko'rsatadi.Bir vaqtning o'zida uchta slayd bo'ylab harakatlanish uchun "Oldingi" va "Keyingi" tugmalaridan foydalaning yoki bir vaqtning o'zida uchta slayd bo'ylab harakatlanish uchun oxiridagi slayder tugmalaridan foydalaning.
2019-yilda koronavirus kasalligi (COVID-19) avj olgandan beri butun dunyo bo'ylab ko'plab tijorat nuklein kislotasini kuchaytirish testlari (NAAT) ishlab chiqildi va standart tahlillarga aylandi.Bir nechta testlar tezda ishlab chiqilgan va laboratoriya diagnostik testlariga qo'llangan bo'lsa-da, bu testlarning ishlashi turli xil sozlamalarda baholanmagan.Shu sababli, ushbu tadqiqot Abbott SARS-CoV-2, Daan Gen, BGI va Sansure Biotech tahlillarining Kompozit Referans Standarti (CRS) yordamida ishlashini baholashga qaratilgan.Tadqiqot Efiopiya jamoat salomatligi institutida (EPHI) 2020-yil 1-30-dekabr kunlari o‘tkazildi. QIAamp RNK mini to‘plami va Abbott DNK namunalarini tayyorlash tizimi yordamida 164 ta nazofarengeal namunalar olingan.164 ta namunadan 59,1% ijobiy va 40,9% CRS uchun salbiy bo'lgan. Sansure Biotech pozitivligi CRS bilan solishtirganda sezilarli darajada past edi (p <0.05). Sansure Biotech pozitivligi CRS bilan solishtirganda sezilarli darajada past edi (p <0.05). Polojitelnye natijalar Sansure Biotech tomonidan sravneniyu s CRS (p < 0,05) bo'yicha hech qanday ma'lumotga ega emas. Sansure Biotechning ijobiy natijalari CRS bilan solishtirganda sezilarli darajada past edi (p <0,05).chnCRS língí，Sansure Biotech língíngíngíníngínjínjínjēng (p < 0.05）。chnCRS língí，Sansure Biotech língíngíngíníngínjínjínjēng (p < 0.05）。 U Sansure Biotech tomonidan sravneniyu bo'yicha CRS (p < 0,05) bo'yicha aniq natijalarga erishdi. Sansure Biotech CRS bilan solishtirganda sezilarli darajada kamroq ijobiy natijalarga ega (p <0,05).To'rtta tahlilning umumiy kelishuvi CRS bilan solishtirganda 96,3-100% ni tashkil etdi.Sansure Biotech tahlilining past pozitivlik darajasiga qo'shimcha ravishda, to'rtta tahlilning samaradorligi deyarli taqqoslangan.Shunday qilib, Sansure Biotech [Faqat tadqiqot (RUO)] tahlili Efiopiyada foydalanish uchun qo'shimcha tekshirishni talab qiladi.Nihoyat, tegishli ishlab chiqaruvchining da'volari bilan tahlillarni baholash uchun qo'shimcha tadqiqotlar ko'rib chiqilishi kerak.
Laboratoriya tekshiruvi Jahon sog‘liqni saqlash tashkilotining (JSST) 2019-yilgi Koronavirus kasalligiga (COVID-19) tayyorgarlik va javob choralari (SPRP) bo‘yicha strategik rejasining bir qismidir.JSST mamlakatlarga tayyorgarlikni yaxshilash, vaziyatni to'g'ri boshqarish, hushyorlik va sog'liqni saqlash muammolariga tezkor javob berish uchun laboratoriya salohiyatini oshirish kerakligini tavsiya qiladi.Bu shuni ko'rsatadiki, laboratoriyaning o'rni paydo bo'lgan yuqumli agentlarning kasalligi va epidemiologiyasini tavsiflash va ularning tarqalishini nazorat qilishda asosiy hisoblanadi.
COVID-19 tashxisi uchun epidemiologik va tibbiy ma'lumotlar, shaxsiy alomatlar/belgilar, rentgenografiya va laboratoriya ma'lumotlari kerak2.Xitoyning Vuxan shahrida COVID-19 epidemiyasi haqida xabar berilgandan beri butun dunyo bo'ylab ko'plab tijorat nuklein kislotasini kuchaytirish testlari (NAATs) ishlab chiqilgan.Haqiqiy vaqtda teskari transkripsiyali polimeraza zanjiri reaktsiyasi (rRT-PCR) og'ir o'tkir respirator sindrom 2 (SARS-CoV-2)3 infektsiyasini laboratoriya diagnostikasi uchun odatiy va standart usul sifatida ishlatilgan.SARS-CoV-2 ni molekulyar aniqlash odatda N (nukleokapsid oqsili geni), E (konvert oqsili geni) va RdRp (RNKga bog'liq RNK polimeraza geni) genlariga asoslanadi ORF1a/b (ochiq o'qish ramkasi 1a/b) .gen) virus genomidan aniqlangan mintaqa.Ular virusni aniqlash uchun virus genomlarida topilgan asosiy saqlanib qolgan hududlar hisoblanadi4.Bu genlar orasida RdRp va E genlari yuqori analitik aniqlash sezgirligiga ega, N geni esa past analitik sezuvchanlikka ega5.
PCR tahlillarining ishlashi turli omillarga qarab farq qilishi mumkin, masalan: ekstraksiya reagentlari, kuchaytirish/aniqlash reagentlari, ekstraksiya usuli, PCR mashinasining sifati va boshqa asboblar.2020-yil aprel oyi holatiga koʻra, toʻqqiz mamlakatdan 48 dan ortiq turli diagnostika qurilmalari COVID-196 diagnostikasi uchun Favqulodda foydalanish ruxsatnomasini (EUA) oldi.Efiopiyada 26 ta davlat sog‘liqni saqlash muassasalarida, jumladan, ABI 7500, Abbott m2000, Roche 48000 va Quant-studio7 da SARS-CoV-2 ni PCR aniqlash uchun 14 dan ortiq real vaqtda PCR platformalaridan foydalaniladi.Bundan tashqari, Daan Gen testi, Abbott SARS-CoV-2 testi, Sansure Biotech testi va SARS-CoV-2 BGI testi kabi turli xil PCR test to'plamlari mavjud.rRT-PCR juda sezgir bo'lsa-da, COVID-19 bilan kasallangan ba'zi bemorlar noto'g'ri yig'ish, tashish, saqlash va ishlov berish va laboratoriya sinovlari tufayli namunalarda virusli ribonuklein kislotasi (RNK) nusxalari etarli emasligi sababli noto'g'ri salbiy natijalar haqida xabar berishadi.xodimlarning shartlari va harakatlari8.Bundan tashqari, namuna yoki nazoratni noto‘g‘ri ishlatish, sikl chegarasini (Ct) belgilash va boshqa patogen nuklein kislotalar yoki faol bo‘lmagan/qoldiq SARS-CoV-2 RNK bilan o‘zaro reaktivlik rRT-PCR9 tahlillarida noto‘g‘ri ijobiy natijalarga olib kelishi mumkin.Shunday qilib, PCR testlari haqiqatan ham gen fragmentlarining tashuvchilarini aniqlay olishi aniq, chunki ular haqiqatan ham faol virus genlarini ajrata olmaydi, shuning uchun testlar bemorlarni emas, balki faqat tashuvchilarni aniqlay oladi10.Shuning uchun, bizning sharoitimizda standart usullardan foydalangan holda diagnostika samaradorligini baholash muhimdir.Efiopiya sog'liqni saqlash institutida (EPHI) va butun mamlakat bo'ylab ko'plab NAAT reagentlari mavjud bo'lsa-da, ularning samaradorligini qiyosiy baholash hali xabar qilinmagan.Shu sababli, ushbu tadqiqot klinik namunalar yordamida rRT-PCR orqali SARS-CoV-2 ni aniqlash uchun sotiladigan to'plamlarning qiyosiy ish faoliyatini baholashga qaratilgan.
Ushbu tadqiqotga COVID-19 gumon qilingan jami 164 ishtirokchi kiritilgan.Namunalarning aksariyati davolash markazlaridan (118/164 = 72%), qolgan 46 (28%) ishtirokchilar esa davolanmagan markazlardan edi.Markazda davolanmagan ishtirokchilar orasida 15 (9,1%) klinik shubhali holatlar va 31 (18,9%) tasdiqlangan holatlar bilan aloqada bo'lgan.To'qson uchta (56,7%) ishtirokchilar erkak edi va ishtirokchilarning o'rtacha (± SD) yoshi 31,10 (± 11,82) yil edi.
Ushbu tadqiqotda COVID-19 uchun to'rtta testning ijobiy va salbiy ko'rsatkichlari aniqlandi.Shunday qilib, Abbott SARS-CoV-2 tahlili, Daan Gen 2019-nCoV tahlili, SARS-CoV-2 BGI tahlili va Sansure Biotech 2019-nCoV tahlilining ijobiy ko'rsatkichlari mos ravishda 59,1%, 58,5%, 57,9% va 55,5% ni tashkil etdi. .Ijobiy va salbiy kompozit mos yozuvlar standarti (CRS) ballari mos ravishda 97 (59,1%) va 67 (40,9%) edi (1-jadval).Ushbu tadqiqotda CRS ta'rifi "har qanday ijobiy" qoidaga asoslangan bo'lib, to'rtta test natijalaridan bir xil natijani bergan ikki yoki undan ortiq test natijalari haqiqiy ijobiy yoki salbiy deb hisoblanadi.
Ushbu tadqiqotda biz CRS bilan solishtirganda barcha tahlillar uchun 100% (95% CI 94,6–100) salbiy foiz kelishuvini (NPA) topdik.Sansure Biotechnology tahlili minimal PPA ni 93,8% (95% CI 87,2-97,1) ko‘rsatdi va Daan Gen 2019-nCoV tahlilida umumiy kelishuv 99,4% (95% CI 96,6-99,9) bo‘ldi.Aksincha, SARS-CoV-2 BGI tahlili va Sansure Biotech 2019-nCoV tahlili oʻrtasidagi umumiy kelishuv mos ravishda 98,8% va 96,3% ni tashkil etdi (2-jadval).
Koenning CRS va Abbott SARS-CoV-2 tahlil natijalari o'rtasidagi kelishuvning kappa koeffitsienti to'liq mos edi (K = 1,00).Xuddi shunday, Daan Gene 2019-nCoV, SARS-CoV-2 BGI va Sansure Biotech 2019-nCoV tomonidan aniqlangan Koenning kappa qiymatlari ham CRS (K ≥ 0,925) bilan to'liq mos keladi.Ushbu qiyosiy tahlilda chi-kvadrat testi (McNemar testi) Sansure Biotech 2019-nCoV tahlili natijalari CRS natijalaridan (p = 0,031) sezilarli darajada farq qilishini ko'rsatdi (2-jadval).
Shaklda ko'rsatilganidek.1 Abbott SARS-CoV-2 tahlilining (birlashtirilgan RdRp va N geni) eng past Ct qiymati (< 20 Ct) ulushi 87,6% va Sansure Biotech 2019-nCoV tahlilining ORF1a/b geni Ct qiymati past ekanligini ko'rsatdi. Ct qiymati (< 20 Ct) 50,3% va yuqori Ct qiymati (36-40 Ct) 3,2% edi. 1 Abbott SARS-CoV-2 tahlilining (birlashtirilgan RdRp va N geni) eng past Ct qiymati (< 20 Ct) ulushi 87,6% va Sansure Biotech 2019-nCoV tahlilining ORF1a/b geni Ct qiymati past ekanligini ko'rsatdi. Ct qiymati (< 20 Ct) 50,3% va yuqori Ct qiymati (36-40 Ct) 3,2% edi.Shaklda ko'rsatilganidek.1, protsent naimenshego znacheniya Ct (< 20 Ct) analiza Abbott SARS-CoV-2 (kombinirovannyy gen RdRp i N) 87,6%, a change Ct gena ORF1a/b analiza Sansure Biotech 2019-nCoV-2019-nCoV tahlili (< 20 Ct) barqaror 50,3%, yuqori darajadagi Ct (36-40 Ct) 3,2% ga teng. 1, Abbott SARS-CoV-2 (birlashgan gen RdRp va N) ning eng past Ct qiymati (< 20 Ct) tahlilining ulushi 87,6% ni tashkil etdi va Sansure Biotech 2019-nCoV ning ORF1a/b gen tahlilining Ct qiymati ko'rsatdi. past Ct qiymatining ulushi (< 20 Ct) 50,3% ni va yuqori qiymat Ct (36-40 Ct) 3,2% ni tashkil qiladi.① ② ③ ④, Abbott Sars-2 检测 (结合 RDRP 和 N 为 低 低 低 低 低 低 低 低 低 低 低 低 低 低 低 最 ↑ 的 的 的 的 的 的 的 值 值 值 值chàn (< 20 Ct) línjíníshín 50,3%，līnīčiči (36–40 Ct) línjínjín 3.2%。 1-rasmda ko'rsatilganidek, Abbott SARS-CoV-2 testining Ct qiymatining eng past foizi (< 20 Ct) (RdRp va N geni kombinatsiyasi) 87,6%, Sansure Biotech 2019-nCoV testining ORF1a/b geni Ct qiymati past ko'rsatadi Ctjàn(<20 Ct) lín foiz 50,3%, línCt (36-40 Ct) lí foiz 3,2%. Kak pokazano na risunke 1, tahlil Abbott SARS-CoV-2 (sochetayushchiy geny RdRp i N) imel samoe nisskoe protsentnoe znachenie Ct (< 20 Ct) va har 87,6%, a snachenie Ct gena ORF1a/b Biotech Sanise19 - Analiz nCoV pokazal nizkiy Ct. 1-rasmda ko'rsatilganidek, Abbott SARS-CoV-2 tahlili (RdRp va N genlarini birlashtirgan) eng past foizli Ct qiymatiga (<20 Ct) 87,6% da, Sansuredagi ORF1a/b genining Ct qiymatiga ega bo'lgan. Biotech 2019 tadqiqoti - nCoV tahlili past Ct ni ko'rsatdi. Protsent znacheniy (< 20 Ct) 50,3%, a protsent yuqori darajadagi Ct (36–40 Ct) 3,2% ni tashkil qiladi. Qiymatlar ulushi (< 20 Ct) 50,3% ni, yuqori Ct qiymatlari ulushi (36-40 Ct) 3,2% ni tashkil etdi.Abbott SARS-CoV-2 B testi 30 dan yuqori Ct qiymatlarini qayd etdi. Boshqa tomondan, BGI SARS-CoV-2 tahlilida ORF1a/b geni yuqori Ct qiymatiga ega (> 36 Ct) foiz 4% ni tashkil etdi (1-rasm). Boshqa tomondan, BGI SARS-CoV-2 tahlilida ORF1a/b geni yuqori Ct qiymatiga ega (> 36 Ct) foiz 4% ni tashkil etdi (1-rasm). BGI SARS-CoV-2 genini tahlil qilish ORF1a/b imel vysokoe znachenie Ct (> 36 Ct), protsent 4% (1-rasm). Boshqa tomondan, BGI SARS-CoV-2 genini tahlil qilishda ORF1a/b yuqori Ct qiymatiga ega (> 36 Ct), uning ulushi 4% ni tashkil etdi (1-rasm).síngíngín, BGI SARS-CoV-2 língínín, ORF1a/b chíngíníínínínCtínjínín Ct línjín> 36 Ct）lín14mínmēngjēng Boshqa tomondan, BGI SARS-CoV-2 ni aniqlashda yuqori Ct qiymatiga ega (>36 Ct) ORF1a/b genining ulushi 4% ni tashkil qiladi (1-rasm). BGI SARS-CoV-2 protsent genov ORF1a/b ning yuqori ko'rsatkichlari Ct (>36 Ct) 4% ni tashkil qiladi (1-rasm). Boshqa tomondan, BGI SARS-CoV-2 tahlilida yuqori Ct qiymatlari (>36 Ct) bo'lgan ORF1a/b genlarining ulushi 4% ni tashkil etdi (1-rasm).
Ushbu tadqiqotda biz 164 ta nazofarengeal namuna oldik.Barcha turdagi tahlillar uchun RNK izolyatsiyasi va kuchaytirilishi tegishli ishlab chiqaruvchilar tomonidan tavsiya etilgan usullar va to'plamlar yordamida amalga oshirildi.
Ushbu tadqiqot Abbottning SARS-CoV-2 testi CRS bilan bir xil aniqlash ko'rsatkichiga ega ekanligini ko'rsatdi, 100% ijobiy, salbiy va umumiy muvofiqlik.Koenning kappa kelishuvi 1.00 bo'lib, CRS bilan to'liq kelishuvni bildiradi.AQShdagi Vashington universiteti tomonidan o'tkazilgan shunga o'xshash tadqiqot shuni ko'rsatdiki, SARS-CoV-2 uchun Abbott testining umumiy sezuvchanligi va o'ziga xosligi CDC laboratoriya tomonidan aniqlangan tahliliga (LDA) nisbatan mos ravishda 93% va 100% ni tashkil etdi. .11. Abbott SARS-CoV-2 ni aniqlash tizimi N va RdRp genlarini bir vaqtda birgalikda aniqlashga asoslangan, chunki ikkala gen ham sezgirroq bo'lib, soxta negativlarni minimallashtiradi12.Avstriyaning Vena shahrida o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, katta miqdordagi ekstraksiya namunalari va aniqlovchi eluent hajmlari suyultirish effektlarini minimallashtirgan va aniqlash samaradorligini oshirgan13.Shunday qilib, Abbottning SARS-CoV-2 tahliliga mukammal mos kelishi bir vaqtning o'zida kombinatsion genlarni aniqlaydigan, ko'p miqdordagi namunalarni (0,5 ml) chiqaradigan va ko'p miqdorda eluent (40 µl) ishlatadigan platformani aniqlash tizimi bilan bog'lanishi mumkin.
Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, Daan genetik testining aniqlash ko'rsatkichi CRS bilan deyarli bir xil edi.Bu Xitoyning Xuaynan shahridagi Anxuy universitetida o'tkazilgan tadqiqot14 va ishlab chiqaruvchining 100% ijobiy kelishuv haqidagi da'vosiga mos keladi.Izchil natijalar haqidagi xabarlarga qaramay, bitta namuna xuddi shu elyuatni qayta sinovdan o'tkazgandan so'ng noto'g'ri salbiy, ammo Abbott SARS-CoV-2 va Sansure Biotech nCoV-2019 tahlillarida ijobiy bo'lgan.Bu har xil turdagi tahlillar bo'yicha natijalarning o'zgaruvchanligi bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. Shunga qaramay, Xitoyda o'tkazilgan tadqiqotda15, Daan Gen tahlilining natijasi laboratoriyada aniqlangan mos yozuvlar tahliliga nisbatan sezilarli darajada farq qildi (p <0,05). Shunga qaramay, Xitoyda o'tkazilgan tadqiqotda15, Daan Gen tahlilining natijasi laboratoriyada aniqlangan mos yozuvlar tahliliga nisbatan sezilarli darajada farq qildi (p <0,05). Tem ne mene, v issledovanii, provedennom v Kitae15, natijalar tahlili Daan Gene znachitelno otlichalsya (p < 0,05) ot ix laboratornogo etalonnogo analiza. Biroq, Xitoyda o'tkazilgan tadqiqotda15, Daan Genning tahlil natijasi laboratoriya ma'lumotnoma tahlilidan sezilarli darajada farq qilgan (p <0,05).①, ② ③ ④ 15, 大安 基因 基因 基因 与 验室 验室 定义 定义 验室 定义 参考 参考 参考 参考①, ② ③ ④ 15, 大安 基因 基因 基因 其 实 定义 定义 定义 的 的 参考 检测 显着 Odnako v issledovanii, provedennom v Kitae15, resultaty genetika testa Daan znachitelno otlichalis (p < 0,05) po sravneniyu s ego etalonnym laboratoriya testom. Biroq, Xitoyda o'tkazilgan tadqiqotda15, Daanning genetik testi natijalari uning mos yozuvlar laboratoriya testidan sezilarli darajada farq qilgan (p <0,05).Ushbu nomuvofiqlik SARS-CoV-2 ni aniqlash uchun mos yozuvlar testining sezgirligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin va keyingi tadqiqotlar sababni aniqlash uchun muhim bo'lishi mumkin.
Bundan tashqari, bizning tadqiqotimiz SARS-CoV-2 BGI tahlilining CRS bilan qiyosiy ishlashini baholadi, bu juda yaxshi ijobiy foiz kelishuvini (PPA = 97,9%), salbiy foiz kelishuvini (NPA = 100%) va jins bo'yicha umumiy foiz kelishuvini ko'rsatdi ( OPA).).= 98,8%).Koenning Kappa qiymatlari yaxshi kelishuvni ko'rsatdi (K = 0,975).Niderlandiya16 va Xitoyda15 olib borilgan tadqiqotlar izchil natijalarni ko'rsatdi.SARS-CoV-2 BGI testi 10 µl kuchaytirish/aniqlash elyuati yordamida bitta genni (ORF1a/b) aniqlash testidir.Ma'lumotnoma natijalarimiz bilan yaxshi statistik kelishuvga qaramay, tahlil umumiy namunaning ikkita ijobiy namunasini (1,22%) o'tkazib yubordi.Bu bemor va jamiyat darajasida uzatish dinamikasiga katta klinik ta'sir ko'rsatishi mumkin.
Ushbu tadqiqotga kiritilgan yana bir qiyosiy tahlil Sansure Biotech nCoV-2019 rRT-PCR (RUO) tahlili edi;umumiy o'yin ulushi 96,3% ni tashkil etdi.Kelishuvning kuchi, shuningdek, Koenning Kappa qiymati bilan ham aniqlandi, bu CRS bilan to'liq kelishuvni ko'rsatuvchi 0,925 edi.Shunga qaramay, bizning natijalarimiz Xitoyning Changsha shahridagi Markaziy Janubiy universitetida va Liuzjou xalq kasalxonasining klinik laboratoriya bo'limida o'tkazilgan tadqiqotlar bilan bir xil. Yuqoridagi yaxshi statistik muvofiqlik qayd etilgan bo'lsa ham, chi-kvadrat testi (MacNemar testi) Sansure Biotech tahlilining natijasi CRS bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli farqga ega ekanligini ko'rsatdi (p <0,005). Yuqoridagi yaxshi statistik muvofiqlik qayd etilgan bo'lsa ham, chi-kvadrat testi (MacNemar testi) Sansure Biotech tahlilining natijasi CRS bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli farqga ega ekanligini ko'rsatdi (p <0,005). Nesmotrya na to, chto bylo zafiksirovano ukazannoe vyshe xoroshee statistichee sootvetstvie, parametr xi-kvadrat (kriteriy Maknemara) pokazal, chto natija tahlil Sansure Biotech imeet statisticheski znachimoe razlichie, CRS po sravnen <05). Yuqoridagi yaxshi statistik kelishuv qayd etilgan bo'lsa-da, chi-kvadrat testi (McNemar testi) Sansure Biotech tahlilining natijasi CRS bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli farqga ega ekanligini ko'rsatdi (p <0,005).① ② ③ ④ shūba, 但 卡方, 但, Sansuci Sansue Biotech ↑① ② ③ ④ shūba, 但 检验 (Macnegar ↓ ↑, Sansusan Biotex ↑) 。。）））） Nesmotrya na otmechennoe vyshe xoroshee statistikcheskoe sootvetstvie, xi-kvadrat (kriteriy Maknemara) pokazal statistik znachimuyu raznitu (p < 0,005) Sansure Biotech va CRS tahlillari. Yuqorida qayd etilgan yaxshi statistik kelishuvga qaramay, chi-kvadrat testi (McNemar testi) Sansure Biotech assay va CRS o'rtasida statistik jihatdan muhim farqni (p <0,005) ko'rsatdi.Oltita namuna (3,66%) CRS bilan solishtirganda noto'g'ri salbiy deb topildi (qo'shimcha 1-jadval);bu juda muhim, ayniqsa virusning tarqalish dinamikasini hisobga olgan holda.Yuqoridagi ma'lumotlar ham bu past aniqlash tezligini qo'llab-quvvatlaydi15.
Ushbu tadqiqotda har bir tahlil va tegishli platforma uchun Ct qiymatlari aniqlandi, Abbott SARS-CoV-2 tahlilida qayd etilgan eng past o'rtacha Ct qiymati.Bu natija Abbottning SARS-CoV-2 ni aniqlash uchun bir vaqtning o'zida birlashgan genetik test tizimi bilan bog'liq bo'lishi mumkin.Shuning uchun, 1-rasmga ko'ra, Abbott SARS-CoV-2 natijalarining 87,6% Ct qiymatlari 20 dan past bo'lgan. Namuna natijalarining ozgina qismi (12,4%) 20-30 oralig'ida edi.30 dan yuqori Ct qiymatlari qayd etilmagan.Abbottning SARS-CoV-2 panel genetik test formatidan foydalanishiga qo'shimcha ravishda, bu natija pastki aniqlash chegarasi (32,5 RNK nusxasi / ml)18 bilan bog'liq bo'lishi mumkin, bu kompaniyaning pastki chegarasi - 100 RNK nusxasidan uch baravar past. /ml.ml) 19.
Ushbu tadqiqotda ba'zi cheklovlar mavjud: birinchidan, resurslar etishmasligi tufayli bizda standart/ma'lumotnoma usullari [masalan, virusli yuk yoki boshqa laboratoriya testlari (LDA)] yo'q.Ikkinchidan, ushbu tadqiqotda foydalanilgan barcha namunalar nazofarengeal tamponlar edi, natijalar esa boshqa namunalar turlariga taalluqli emas edi, uchinchidan, bizning namunamiz kichik edi.
Ushbu tadqiqot nazofarengeal namunalar yordamida SARS-CoV-2 uchun to'rtta rRT-PCR tahlilining samaradorligini taqqosladi.Sansure Biotech tahlili bundan mustasno, barcha aniqlash tahlillari deyarli taqqoslanadigan ko'rsatkichlarga ega edi. Bundan tashqari, Sansure Biotech tahlilida CRS bilan solishtirganda past pozitivlik darajasi aniqlandi (p <0,05). Bundan tashqari, Sansure Biotech tahlilida CRS bilan solishtirganda past pozitivlik darajasi aniqlandi (p <0,05). Krome togo, v teste Sansure Biotech by vyyavlen nisbiy protsent polojitelnyh natijalari bo'yicha sravneniyu CRS (p < 0,05). Bundan tashqari, Sansure Biotech testi CRS bilan solishtirganda ijobiy natijalarning past foizini ko'rsatdi (p <0,05).chàngāngī，sīCRS yīīmī，Sansure Biotech līngīngčičičičičić (p < 0.05)。chàngāngī，sīCRS yīīmī，Sansure Biotech līngīngčičičičičić (p < 0.05)。 Krome togo, analiz Sansure Biotech imel bolee nizkiy uroven polojitelnyh natijalari bo'yicha sravneniyu CRS (p < 0,05). Bundan tashqari, Sansure Biotech tahlili CRS bilan solishtirganda pastroq ijobiylik darajasiga ega edi (p <0,05).PPA, NPA va umumiy kelishuvning Sansure Biotech nCoV-2019 (RUO) tahlili 93,5% dan oshdi, Cohen Kappa kelishuv qiymati 0,925.Nihoyat, Sansure Biotech Assay (RUO) Efiopiyada foydalanish uchun qo'shimcha tekshirishga muhtoj va alohida ishlab chiqaruvchilarning da'volarini baholash uchun qo'shimcha tadqiqotlar ko'rib chiqilishi kerak.
Qiyosiy tadqiqot loyihasi Addis-Abebadagi to'rtta sog'liqni saqlash muassasalarida, Eka Kotebe kasalxonasida, Mingyillik cherkovi davolash markazida, Zevuditu memorial kasalxonasida va Avliyo Pyotr sil kasalligi bo'yicha mutaxassis kasalxonasida o'tkazildi.Maʼlumotlar 2020-yilning 1-dan 31-dekabriga qadar toʻplangan. Ushbu tadqiqot uchun tibbiy muassasalar kasallanish holatlari koʻpligi va shaharda yirik davolash markazlarining mavjudligi asosida maqsadli tanlangan.Xuddi shunday, asboblar, shu jumladan ABI 7500 va Abbott m2000 real vaqtda PCR asboblari NAAT reagentlarini ishlab chiqaruvchilarning tavsiyalariga muvofiq tanlangan va ushbu tadqiqot uchun to'rtta PCR aniqlash to'plami tanlangan, chunki Efiopiyadagi ko'pgina laboratoriyalar kamida kamida ishlatilgan. ulardan to'rttasi.Tadqiqot davomida o'tkazilgan gen testi, Abbott SARS-CoV-2 testi, Sansure Biotech testi va SARS-CoV-2 BGI testi).
SARS-CoV-2 uchun test 2020-yil 1-30-dekabr kunlarida EPHIga havola qilingan COVID-19 uchun tekshirilayotgan shaxslardan 3 ml Virusli Transport vositasi (VTM) (Miraclean Technology, Shenchjen, Xitoy) yordamida oʻtkazildi.Nazofarengeal namunalar o'qitilgan namuna yig'uvchilar tomonidan to'plangan va uch paketda EPHIga yuborilgan.Nuklein kislotasini ajratishdan oldin har bir namunaga noyob identifikatsiya raqami beriladi.Ekstraksiya har bir namunadan kelgandan so'ng darhol qo'lda va avtomatik ekstraksiya usullari yordamida amalga oshiriladi.Shunday qilib, Abbott m2000 ning avtomatik ekstraktsiyasi uchun har bir namunadan 1,3 ml (shu jumladan, 0,8 ml o'lik hajm va 0,5 ml ekstraksiya kirish hajmi) namuna olindi va Abbott DNK namunasini tayyorlash tizimidan o'tkazildi (Abbott Molecular Inc. des Plaines, IL, AQSh).) 96 ta [92 ta namuna, ikkita aniqlash nazorati va ikkita shablonsiz boshqaruv (NTC)] partiyasi real vaqtda SARS-CoV-2 (EUA) ning ikki raundining umumiy jarayoniga (qidiruv va aniqlash) kiritildi.kon.Xuddi shunday, qo'lda ekstraktsiya qilish uchun bir xil namunalardan foydalaning (avtomatik qazib olish va kashf qilish uchun).Shunday qilib, butun jarayon davomida 140 µl namunalar QIAamp Virusli RNK Mini Kit (QIAGEN GmbH, Hilden, Germaniya) yordamida to‘qqiz tur davomida 24 ta partiyada (jumladan, 20 ta namuna, ikkita tahlil nazorati va ikkita NTC) ajratildi va ekstraksiya qilindi.Qo'lda ekstraksiya qilingan eluatlar kuchaytirildi va SARS-CoV-2 BGI tahlili, Daan Gen tahlili va Sansure Biotech tahlili yordamida ABI 7500 termal siklator yordamida aniqlandi.
SARS-CoV-2 virusli RNKni avtomatlashtirilgan izolyatsiya qilish va tozalash Abbott DNK namunasini tayyorlash reagentlari yordamida magnit boncuk printsipiga amal qiladi.Namunalarni inaktivatsiya qilish va virusli zarrachalarni eritish oqsilni denatüratsiya qilish va RNazni inaktivatsiya qilish uchun guanidin izotiyosiyanat o'z ichiga olgan yuvish vositasi yordamida amalga oshiriladi.Keyin RNK kremniy dioksidi yordamida qattiq fazani ajratish yo'li bilan oqsildan ajratiladi, ya'ni guanidin tuzi va liziz tamponining ishqoriy pH darajasi nuklein kislotalarning kremniy oksidi (SiO2) bilan bog'lanishiga yordam beradi.Durulama bosqichi aniq eritma hosil qilish uchun qolgan oqsillar va qoldiqlarni olib tashlaydi.Shaffof RNK kremniy dioksidiga asoslangan mikrozarrachalardan asbobning magnit maydonidan foydalangan holda ajratiladi20,21.Boshqa tomondan, RNKni qo'lda izolyatsiya qilish va tozalash magnit stend o'rniga santrifüjlash va mikrozarrachalarni elimentdan ajratish o'rniga spin kolonnasi usuli bilan amalga oshiriladi.
Abbott Real-Time SARS-CoV-2 ni aniqlash testi (Abbott Molecular, Inc.) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi, u JSST va FDAdan EUA19,22 olgan.Ushbu protokolda ekstraktsiyadan oldin namunani inaktivatsiya qilish suv hammomida 56 ° C da 30 daqiqa davomida amalga oshirildi.Virus inaktivatsiyasidan so'ng, Abbott m2000 DNK namunasini tayyorlash tizimi yordamida 0,5 ml VTM dan Abbott m2000 SP asbobida nuklein kislota ekstraktsiyasi amalga oshirildi.ishlab chiqaruvchiga ko'ra.Amplifikatsiya va aniqlash Abbott m2000 RT-PCR asbobi yordamida amalga oshirildi va RdRp va N genlari uchun ikkilamchi aniqlash amalga oshirildi.ROX) va VIC P (xususiy bo'yoq) ichki nazoratni nishonga olish va aniqlash uchun ikkala kuchaytiruvchi mahsulotni bir vaqtning o'zida aniqlash imkonini beradi 19 .
Ushbu to'plamning kuchaytirishni aniqlash usuli bir bosqichli RT-PCR texnologiyasiga asoslangan.ORF1a/b va N genlari maqsadli hududning kuchayishini aniqlash uchun Daan Gene Technology tomonidan saqlangan hududlar sifatida tanlangan.Maxsus primerlar va lyuminestsent zondlar (FAM bilan belgilangan N gen zondlari, VIC bilan belgilangan ORF1a/b zondlari) namunalarda SARS-CoV-2 RNKni aniqlash uchun mo‘ljallangan.Yakuniy eluent va asosiy aralashmalar 25 mkl yakuniy hajmga qadar 20 mkl asosiy aralashmaga 5 mkl eluent qo'shib tayyorlandi.Kuchaytirish va aniqlash bir vaqtning o'zida ABI 750024 real vaqtda PCR asbobida amalga oshirildi.
ORF1a/b va N genlari Sansure Biotech nCoV-2019 Nuklein kislota diagnostika to'plami (lyuminestsent PCR aniqlash) yordamida aniqlandi.ORF1a/b hududi uchun FAM kanalini va N geni uchun ROX kanalini tanlash orqali har bir maqsadli gen uchun maxsus zondlarni tayyorlang.Ushbu tahlil to'plamiga eluent va asosiy aralash reagentlar quyidagicha qo'shiladi: aniqlash/kuchaytirish uchun 30 µl asosiy aralash reagent va 20 µl elutlangan namunani tayyorlang.Kuchaytirish/aniqlash uchun real vaqtda PCR ABI 750025 ishlatilgan.
SARS-CoV-2 BGI testi bu COVID-19 diagnostikasi uchun real vaqtda lyuminestsent rRT-PCR to'plamidir.Maqsadli hudud SARS-CoV-2 genomining ORF1a/b hududida joylashgan bo‘lib, bu yagona genni aniqlash usuli hisoblanadi.Bundan tashqari, insonning uy xo'jaligi geni b-aktin ichki tartibga solinadigan maqsadli gendir.Asosiy aralash 20 µl asosiy aralash reagentini va 10 µl ekstrakte qilingan RNK namunasini quduq plastinkasida aralashtirish orqali tayyorlanadi26.Kuchaytirish va aniqlash uchun ABI 7500 lyuminestsent miqdoriy real vaqtda PCR asbobi ishlatilgan.Barcha nuklein kislotani kuchaytirish, har bir tahlil uchun PCR ishga tushirish shartlari va natijalarni talqin qilish tegishli ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi (3-jadval).
Ushbu qiyosiy tahlilda biz to'rtta tahlil uchun foiz kelishuvini (ijobiy, salbiy va umumiy) va boshqa taqqoslash parametrlarini aniqlash uchun mos yozuvlar standart usulidan foydalanmadik.Har bir test taqqoslash CRS bilan amalga oshirildi, ushbu tadqiqotda CRS "har qanday ijobiy" qoidasi bilan o'rnatildi va natija bitta test bilan emas, balki aniqlandi, biz kamida ikkita mos keladigan test natijalaridan foydalandik.Bundan tashqari, COVID-19 yuqishida noto'g'ri salbiy natijalar noto'g'ri ijobiy natijalardan ko'ra xavfliroqdir.Shuning uchun, CRS natijasini iloji boricha aniqroq "ijobiy" deb aytish uchun kamida ikkita tahlil testi ijobiy bo'lishi kerak, ya'ni EUA tahlilidan kamida bitta ijobiy natija chiqishi mumkin.Shunday qilib, to'rtta test natijalaridan bir xil natijani beradigan ikkita yoki undan ortiq test natijalari haqiqiy ijobiy yoki salbiy hisoblanadi18,27.
Ma'lumotlar tuzilgan ma'lumotlarni chiqarish shakllari yordamida to'plangan, ma'lumotlarni kiritish va tahlil qilish Excel statistik dasturiy ta'minoti va tavsiflovchi statistika uchun SPSS 23.0 versiyasi yordamida amalga oshirildi.Ijobiy, salbiy va umumiy foiz kelishuvi tahlil qilindi va har bir usulning CRS bilan kelishish darajasini aniqlash uchun Kappa ballidan foydalanildi.Kappa qiymatlari quyidagicha talqin qilinadi: yumshoq kelishuv uchun 0,01 dan 0,20 gacha, umumiy kelishuv uchun 0,21 dan 0,40 gacha, o'rtacha kelishuv uchun 0,41-0,60, katta kelishuv uchun 0,61-0,80 va to'liq kelishuv uchun 0,81-0,9928.
Axloqiy ruxsatnoma Addis-Abeba universitetidan olingan va ushbu tadqiqot uchun barcha eksperimental protokollar Efiopiya sog'liqni saqlash institutining Ilmiy axloqni tekshirish kengashi tomonidan tasdiqlangan.EPHI Etika litsenziyasi uchun mos yozuvlar raqami EPHI/IRB-279-2020.Barcha usullar COVID-19 ni davolash boʻyicha Efiopiya milliy kompleks yoʻriqnomasining tavsiyalari va qoidalariga muvofiq qoʻllanilgan.Bundan tashqari, tadqiqotda ishtirok etishdan oldin barcha tadqiqot ishtirokchilaridan yozma xabardor qilingan rozilik olingan.
Ushbu tadqiqotda olingan yoki tahlil qilingan barcha ma'lumotlar ushbu nashr etilgan maqolaga kiritilgan.Ushbu tadqiqot natijalarini tasdiqlovchi ma'lumotlar tegishli muallifdan oqilona so'rov bo'yicha mavjud.
Jahon Sog‘liqni saqlash tashkiloti.COVID-19 uchun laboratoriya sinovlari strategiyalari boʻyicha tavsiyalar: Vaqtinchalik koʻrsatma, 2020-yil 21-mart № WHO/2019-nCoV/lab_testing/2020.1 (VOZ, 2020).
Mouliou, DS, Pantazopulos, I. & Gourgoulianis, Favqulodda vaziyatlar bo'limida KI COVID-19 aqlli diagnostikasi: amaliyotda hamma narsa. Mouliou, DS, Pantazopulos, I. & Gourgoulianis, Favqulodda vaziyatlar bo'limida KI COVID-19 aqlli diagnostikasi: amaliyotda hamma narsa.Muliou, DS, Pantazopulos, I. va Gurgulianis, KI. Favqulodda vaziyatlar bo'limida COVID-19 ning aqlli diagnostikasi: amalda hamma narsa.Muliou DS, Pantazopulos I. va Gurgulyanis KI. Favqulodda vaziyatlar bo'limlarida COVID-19 ning aqlli diagnostikasi: amaliyotda oxirigacha integratsiya.Mutaxassis Reverend Respire.dori.3, 263–272 (2022).
Mitchell, SL va Sent-Jorj, K. COVID19 ID NOW EUA tahlilini baholash. Mitchell, SL va Sent-Jorj, K. COVID19 ID NOW EUA tahlilini baholash.Mitchell, SL va Sent-Jorj, K. COVID19 ID NOW EUA tahlilini baholash.Mitchell SL va Sent-Jorj K. COVID19 ID NOW EUA tahlilini baholash.J. Klinik.Virus.128, 104429. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2020.104429 (2020).
JSSV.2019-yilgi koronavirus kasalligini (COVID-19) inson kasalligiga shubha qilingan holda laboratoriya aniqlash.https://www.who.int/publications/i/item/10665-331501 (2020-yil 15-avgustda kirish) (JSST, 2020).
Udugama, B. va boshqalar.COVID-19 diagnostikasi: kasalliklar va sinov vositalari.ACS Nano 14(4), 3822–3835 (2020).
Syed S. va boshqalar.Sharqiy, Markaziy va Janubiy Afrikadagi patologlar kollejini tashkil etish - Yaqin Sharq va Janubiy Afrika mintaqaviy patologiya maktabi.Afrika.J. Laboratoriya.dori.9(1), 1-8 (2020).
Efiopiya sog'liqni saqlash instituti, Federal Sog'liqni saqlash vazirligi.Vaqtinchalik milliy strategiya va COVID-19 laboratoriya diagnostikasi bo'yicha qo'llanma.https://ephi.gov.et/images/novel_coronavirus/EPHI_PHEOC_COVID-19_Laboratory_Diagnosis_Eng.pdf (2020-yil 12-avgustda foydalanilgan) (EPHI, 2020).
Voloshin, S., Patel, N. va Kesselxaym, AS SARS-CoV-2 infektsiyasining qiyinchiliklari va oqibatlari uchun noto'g'ri salbiy testlar. Voloshin, S., Patel, N. va Kesselxaym, AS SARS-CoV-2 infektsiyasining qiyinchiliklari va oqibatlari uchun noto'g'ri salbiy testlar.Voloshin S., Patel N. va Kesselxaym AS SARS-CoV-2 infektsiyalari va ularning oqibatlari uchun noto'g'ri-salbiy testlar.Voloshin S., Patel N. va Kesselxaym AS. Provokatsiya va SARS-CoV-2 infektsiyasining ta'siri uchun noto'g'ri-salbiy testlar.N. eng.J. Tibbiyot.383(6), e38 (2020).
Mouliou, DS & Gourgoulianis, KI Noto'g'ri ijobiy va noto'g'ri-salbiy COVID-19 holatlari: Nafas olishning oldini olish va davolash strategiyalari, emlash va keyingi istiqbollar. Mouliou, DS & Gourgoulianis, KI Noto'g'ri ijobiy va noto'g'ri-salbiy COVID-19 holatlari: Nafas olishning oldini olish va davolash strategiyalari, emlash va keyingi istiqbollar. Mouliou, DS & Gourgoulianis, KI Lojnopolojitelnye va lojnootritsatelnye sluchaya COVID-19: respiratornaya profilaktika va strategiyasi lecheniya, vaksinatsiya va dalneyshie perspektivy. Mouliou, DS & Gourgoulianis, KI COVID-19 ning noto'g'ri ijobiy va noto'g'ri salbiy holatlari: nafas olishning oldini olish va davolash strategiyalari, emlash va oldinga yo'l.Muliu, DS va Gurgulianis, KI. COVID-19 ning noto'g'ri ijobiy va noto'g'ri-salbiy holatlari: nafas olishning oldini olish va davolash strategiyalari, emlash va oldinga yo'l.Mutaxassis Reverend Respire.dori.15(8), 993–1002 (2021).
Mouliou, DS, Ioannis, P. & Konstantinos, G. Favqulodda yordam bo'limida COVID-19 tashxisi: Daraxtni ko'rish, lekin o'rmonni yo'qotish. Mouliou, DS, Ioannis, P. & Konstantinos, G. Favqulodda yordam bo'limida COVID-19 tashxisi: Daraxtni ko'rish, lekin o'rmonni yo'qotish.Mouliou, DS, Ioannis, P. va Konstantinos, G. Favqulodda yordam bo'limida COVID-19 tashxisi: Daraxtga qarang, o'rmonni yo'qoting.Muliou DS, Ioannis P. va Konstantinos G. Favqulodda yordam xonalarida COVID-19 tashxisi: daraxtlar uchun o'rmon etarli emas.Ko'rinish.dori.J. https://doi.org/10.1136/emermed-2021-212219 (2022).
Degli-Anjeli, E. va boshqalar.Abbott RealTime SARS-CoV-2 tahlilining analitik va klinik samaradorligini tekshirish va tasdiqlash.J. Klinik.Virus.129, 104474. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2020.104474 (2020).
Mollaei, HR, Afshar, AA, Kalantar-Neyestanaki, D., Fazlalipour, M. & Aflatoonian, B. An'anaviy RT-PCR yordamida virus infektsiyasini aniqlash uchun COVID-19 ning turli genom mintaqasidan beshta primer to'plamini solishtirish. Mollaei, HR, Afshar, AA, Kalantar-Neyestanaki, D., Fazlalipour, M. & Aflatoonian, B. An'anaviy RT-PCR orqali virus infektsiyasini aniqlash uchun COVID-19 ning turli genom mintaqalaridan beshta primer to'plamini taqqoslash.Mollaei, HR, Afshar, AA, Kalantar-Neyestanaki, D., Fazlalipur, M. va Aflatunyan, B. An'anaviy RT-PCR yordamida virusli infektsiyani aniqlash uchun COVID-19 genomining turli mintaqalaridan olingan beshta primerlar to'plamini taqqoslash. Mollaei, HR, Afshar, AA, Kalantar-Neyestanaki, D., Fazlalipour, M. & Aflatoonian, B. língíníníní COVID-19 chíngíngíngíngíngíngíngíngíngīngīngīngīngīngīngīng. Mollaei, HR, Afshar, AA, Kalantar-Neyestanaki, D., Fazlalipour, M. & Aflatoonian, B. An'anaviy RT-PCR orqali virusli infektsiyani aniqlash uchun COVID-19 ning 5 xil genetik mintaqalarini taqqoslash.Mollaei HR, Afshar AA, Kalantar-Neyestanaki D, Fazlalipur M. va Aflatunyan B. An'anaviy RT-PCR yordamida virusli infektsiyani aniqlash uchun COVID-19 genomining turli mintaqalaridan olingan besh primerlar to'plamini taqqoslash.Eron.J. Mikrobiologiya.12(3), 185 (2020).
Goertzer, I. va boshqalar.SARS-CoV-2 genomlari ketma-ketligini aniqlash uchun milliy tashqi sifatni baholash dasturining dastlabki natijalari.J. Klinik.Virus.129, 104537. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2020.104537 (2020).
Vang, M. va boshqalar.Koronavirusning og'ir o'tkir respirator sindromi uchun beshta RT-PCR to'plamining samaradorligini analitik baholash 2. J. Klinik.laboratoriya.anus.35(1), e23643 (2021).
Vang B. va boshqalar.Xitoyda real vaqtda polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) asosida sotiladigan yettita SARS-CoV-2 RNK aniqlash to'plamlarini baholash.klinik.Kimyoviy.laboratoriya.dori.58(9), e149–e153 (2020).
van Casteren, PB va boshqalar.Etti tijorat RT-PCR COVID-19 diagnostika to'plamini taqqoslash.J. Klinik.Virus.128, 104412 (2020 yil).
Lu, Yu va boshqalar.SARS-CoV-2 nuklein kislotalarini aniqlash uchun ikkita PCR to'plamining diagnostika samaradorligini taqqoslash.J. Klinik.laboratoriya.anus.34(10), e23554 (2020).
Lefart, PR va boshqalar. To‘rtta SARS-CoV-2 nuklein kislotasini kuchaytirish testi (NAAT) platformalarining qiyosiy o‘rganish shuni ko‘rsatdiki, ID NOW ishlashi bemor va namuna turiga qarab sezilarli darajada pasaygan.tashxis.mikrobiologiya.Yuqtirish.diss.99(1), 115200 (2021).
Abbott molekulasi.Abbott real vaqt rejimida SARS-CoV-2 tahlil paketi varaqasi.https://www.molecular.abbott/us/en/products/infectious-disease/RealTime-SARS-CoV-2-Assay.1-12.(2020-yil 10-avgust holatiga koʻra) (2020-yil).
Klein, S. va boshqalar.RT-qPCR va RT-LAMP yordamida keng miqyosda tezkor aniqlash uchun magnit boncuklar yordamida SARS-CoV-2 RNK izolyatsiyasi.Virus 12(8), 863 (2020).