PCR analizatori muammolarini bartaraf etish: tez-tez beriladigan savollar va echimlar

Polimerase zanjiri reaktsiyasi (PCR) tahlilchilar, tadqiqotchilarga klinik diagnostika bo'yicha genetik tadqiqotlardan tortib olinadigan arizalarni kuchaytirishga imkon beradi. Biroq, har qanday murakkab qurilma singari, PCR anansheri uning ishlashiga ta'sir qiladigan muammolarga duch kelishi mumkin. Ushbu maqolada ba'zi umumiy savollar beriladiPCR analizatorMuammolarni bartaraf etish va umumiy muammolarni amaliy echimlar beradi.

1. Nega mening PCR reaktsiyam kuchaymaydi?

Foydalanuvchilar duch keladigan eng keng tarqalgan muammolardan biri bu PCR maqsadli DNKni kuchaytirishga kirishmaydi. Bunga bir nechta omillar bilan bog'liq bo'lishi mumkin:

Noto'g'ri premer dizayni: Asosingiz maqsad ketma-ketligi uchun o'ziga xos ekanligiga ishonch hosil qiling va mitti haroratiga ega bo'ling (TM). Nonsecratsiyani bekor qilishdan saqlanish uchun primer dizayni uchun dasturiy vositalardan foydalaning.

Shablon DNK etarli emas: siz shablon DNKidan foydalanayotganingizni tekshiring. Juda kam, kuchsiz yoki hech qanday kuchaytirilmaydi.

Namunadagi inhibitorlar: namunadagi ifloslantiruvchi moddalar PCRning reaktsiyasini inhibe qilishlari mumkin. DNKingizni tozalash yoki boshqa qazib olish usulidan foydalanish haqida o'ylang.

Qaror: Arstofsiya konsentratsiyasini oshiring va namunangizda inhibitorlar mavjudligiga ishonch hosil qiling.

2. Nega mening PCR mahsulotim noto'g'ri o'lchamda?

Agar sizning kompyuteringiz katta hajmingiz kutilmagan bo'lsa, u reaktsiya shartlari yoki ishlatiladigan ingredientlar bilan bog'liq muammolarni ko'rsatishi mumkin.

Xususiy bo'lmagan kuchaytirish: Agar insterni bexosdan bog'lasa, bu bo'lishi mumkin. Portlash kabi asboblardan foydalanib, astarchilarning o'ziga xosligini tekshiring.

Noto'g'ri yumshatish harorati: Agar yumshatish harorati juda past bo'lsa, aniq bo'lmagan majburiy emas. Gradient PCR tomonidan yumshatish haroratini optimallashtirish.

Qaror: PCR mahsulotlarining to'g'riligini oshirish uchun birinchi navbatda aniqlik va yumshatish haroratini optimallashtirish.

3 nima qilishim kerak?

PCR analizatoridagi xato xabarlari xavotirli bo'lishi mumkin, ammo ular ko'pincha mumkin bo'lgan muammolarga javob berishlari mumkin.

Kalibratsiya bo'yicha muammolar: PCR analizatorini to'g'ri kalibrlanganligiga ishonch hosil qiling. Oddiy parvarishlash va kalibrlash tekshiruvi aniq natijalarga erishish uchun juda muhimdir.

Dasturiy ta'minot guruhi: Ba'zan, dasturiy xatolar muammolarga olib kelishi mumkin. Kompyuteringizni qayta yoqing va dasturiy ta'minotni yangilash uchun tekshiring.

Qaror: Xato kodeksi uchun foydalanuvchi qo'llanmasini va tavsiya etilgan muammolarni bartaraf etish bo'yicha tavsiya eting. Oddiy parvarishlash ko'plab muammolarning oldini oladi.

4. Nima uchun mening eng asosiy reaktsiya natijalari nomuvofiq?

Noto'g'ri PCR natijalari bir nechta sabablarga ko'ra asabiylashish mumkin:

Rezegent sifati: barcha reaktiv fermentlar, shu jumladan fermentlar, buferlar va Dntps yangi va yuqori sifatli ekanligiga ishonch hosil qiling. Muddati tugagan yoki ifloslangan reaktivlar o'zgaruvchanlikka olib kelishi mumkin.

Termal sikler kalibrlash: nomuvofiq harorat sozlamalari PCR jarayoniga ta'sir qilishi mumkin. Termal tsiklining kalibrratsiyasini muntazam tekshirib turing.

Qaror: yuqori sifatli reaktivlardan foydalanadi va izchil natijalarini ta'minlash uchun issiqlik sellagizni hal qiling.

5. PCR reaktsiyaning samaradorligini qanday yaxshilash mumkin?

PCR reaktsiyalarining samaradorligini oshirish yuqori hosilga va yanada ishonchli natijalarga olib kelishi mumkin.

Reaktsiya shartlarini optimallashtirish: Har xil konsentratsiyalardan foydalangan holda tajriba, shablon DNK va MGC2. Har bir PCR reaktsiyasi optimal ishlash uchun noyob shartlarni talab qilishi mumkin.

Yuqori sodiqlik fermentlaridan foydalaning: Agar aniqlik tanqidiy bo'lsa, kuchaytirish paytida xatolarni minimallashtirish uchun yuqori selitalitar DNK polimerazidan foydalanib ko'ring.

Yechim: O'zingizning maxsus PCR sozlashingiz uchun eng yaxshi sharoitlarni topish uchun optimallashtirish tajribasini o'tkazing.

qisqa bayoni; yakunida

Muammolarni bartaraf etish aPCR analizatorqiyin vazifa bo'lishi mumkin, ammo odatiy muammolarni tushunish va ularning echimlari sizning asosiy tajribangizni sezilarli darajada oshiradi. Ushbu umumiy muammolarni hal qilish orqali tadqiqotchilar PCR natijalarini yaxshilashlari va molekulyar biologiya bo'yicha qo'llanmalarda ishonchli natijalarni ta'minlaydilar. Doimiy parvarish, reaktivlarni sinchkovlik bilan tanlash va reaktsiya shartlarini optimallashtirish PCR tahlili muvaffaqiyatli bo'lgan kalitlardir.